泉州市蓝图生物科技有限公司

 仅供科研使用，不得用于临床检验。人内脂素（VF）定量检测试剂盒（ELISA）说明书【产品名称】通用名称：人内脂素（VF）定量检测试剂盒（ELISA）英文名称：Human Visfatin（VF）ELISA KIT【包装规格】48人份/盒，96人份/盒【预期用途】仅供科研使用，定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中人内脂素（VF）的浓度。【检验原理】本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被抗人内脂素（VF）抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入人内脂素（VF）校准品和待测样本，再加入另一株HRP标记的抗人内脂素（VF）抗体（酶标抗体），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M 硫酸）作用下，最终转化为黄色，在酶标仪上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中人内脂素（VF）的浓度正相关。拟合校准品曲线，可以计算出样本中人内脂素（VF）的浓度。【主要组成成分】主要成分

组分	数量	主要成分
校准品	0.5ml/管*6管	抗原配制的6个浓度标准品
包被微孔板	96T	预包被固相抗体
HRP标记抗体	6mL	HRP标记的检测抗体
底物液A	6mL	过氧化脲工作液
底物液B	6mL	TMB工作液
20×浓缩洗涤液	30mL	含0.15%Tween20的PBS
说明书	1份	--
自封袋	1个	--
不干胶	2片	--

校准品浓度依次为：32、16、8、4、2、0 ng/ml。校准品已经通过测试，结果表明HBs抗原阴性，HIV1、HIV2和HCV抗体阴性，由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质，本品必须按照具有潜在的感染性进行处理，处理过程应当遵循通用的安全措施。需要但未提供的材料及耗材

  1、酶标仪

2、精密移液器及一次性吸头3、蒸馏水4、洗瓶或者自动洗板机5、37℃水浴锅或恒温箱6、500ml量筒7、无粉一次性乳胶手套8、质控品（可从蓝图生物科技产品研发系统中选择）【储存条件及有效期】

  1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。

  2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。

  3、开封后，按照建议的条件保存，校准品、包被微孔板和HRP标记抗体，有效期为14天，其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。

【适用仪器】 半自动的酶标仪，如Thermo MK3，或者国产酶标仪。【样本要求】 样本类型和采集以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中，不得使用叠氮钠做为防腐剂。1、细胞培养上清：4000rpm条件下离心20min，去除细胞颗粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反复冻融。2、血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，4000rpm条件下离心20min，小心地分离出血清，保存在- 20℃以下，避免反复冻融。3、血浆：肝素，EDTA，或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm条件下，离心20分钟取上清，血浆保存在-20℃以下，避免反复冻融。 样本保存和稳定性样本在2-8℃条件下，可以储存72h，或者在- 20℃储存6个月。样本收集后，不是一次检测完，请按一次用量分装冻存，避免反复冻融，使用时在室温下解冻，确保样品均匀充分解冻。【检验方法】试剂准备1、使用前，所有的组分都要至少复温30min，确保充分复温到室温。2、浓缩洗涤液：从冰箱取出的浓缩洗涤液，会有结晶产生，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解。浓缩洗涤液与蒸馏水，按1:20稀释，即1份的浓缩洗涤液，添加19份的蒸馏水。3、底物：底物液A和B，在使用前，按1:1体积充分混合，混合后15分钟内使用。操作程序1、所有试剂和组分都先恢复到室温，标准品、质控品和样品，建议做复孔。2、按前面试剂准备中描述的方法，配制好试剂盒各种组分的工作液。3、从铝箔袋中取出所需板条，剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。4、设置标准品孔、样本孔和空白孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL，样本孔加待测样本50μL，空白孔不加。5、除空白孔外，标准品孔和样本孔，加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体100μL。6、用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。7、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置20s，甩去洗涤液，吸水纸上拍干。8、如此重复4次（共洗板5次）。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，充分拍干反应板。9、将底物A和B按1:1体积充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育15min。10、所有孔加入终止液50μL，在酶标仪上读取各孔吸光度（OD值）。【检验结果的解释】检测完成后，以标准品浓度做为纵坐标，对应的吸光度（OD值）作为横坐标，利用计算机软件，采用四参数Logistic曲线拟合（4-pl），创建标准曲线方程，通过样本的吸光度（OD值），利用方程计算样品的浓度值。如果样品被稀释，通过上述方法测的的浓度值，要乘以稀释倍数，才是样品的最终浓度。【检验方法的局限性】1、仅供科研使用，不得用于临床诊断。2、在试剂盒标示的有效期内使用，过期产品不得使用。3、跟其他厂家的试剂盒或者组分不能混用。4、使用试剂盒配套的样品稀释液。5、如果样本值高于标准品浓度值，请将样本适当稀释后，再重新测定。6、待测样本中存在的人抗鼠等异嗜抗体会干扰检测结果，检测前，请排除该因素。7、通过其他方法得到的检测结果，与本试剂盒测定结果不具有直接的可比性。【产品性能指标】1、物理性能试剂盒的各液体组分应澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真空包装，无破损漏气。2、剂量反应曲线线性校准品剂量反应曲线相关系数r值，大于等于0.9900。3、精密度批内精密度：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在同一个板块内精度评估。批内变异系数CV%小于10%。批间精密度：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在不同板块内精度评估。批间变异系数CV%小于15%。4、灵敏度检出剂量小于0.15ng/mL。5、回收率三组已知的高、中、低浓度样品，进行五次回收率评估，回收率在85%-115%之间。6、特异性本试剂盒识别天然和重组人内脂素（VF），与结构类似物无交叉。7、稳定性    2℃-8℃保存，有效期6个月。【注意事项】生物安全1、检测必须符合实验室管理规范的规定，严格防止交叉污染，所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照传染物进行处置。2、试剂盒的液体组分中，含有proclin-300防腐剂，可能引起皮肤过敏反应，避免吸入烟雾与皮肤接触。3、底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入烟雾。戴上防护手套，实验完成后彻底洗手。 技术提示1、混合蛋白溶液时，避免起泡。2、加校准品与样本时，每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头，公共组分应该悬臂加样，避免交叉污染。3、合适的温育时间，和充分的洗涤步骤，是保证实验结果准确性的必要条件。4、底物溶液为无色液体，保存过程中变为蓝色，代表底物溶液已经失效，不得使用。5、终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致，加入终止液后，蓝色底物产物，会瞬间变为黄色。6、实验中，用剩的板条，应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。7、所有液体组分，使用前充分摇匀，严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。废物处理 所有使用或未使用的试剂，所有污染性的一次性材料，应当遵循传染性或潜在传染性产品的处理程序，每个实验室都有责任根据其实验的类型和危险性级别，进行废物和污物的处理，同时要严格依照有关规定对待所有的废物和污物。【基本信息】 企业名称：泉州市蓝图生物科技有限公司 生产地址：福建省泉州市泉港区界山镇蓝图生物科技园A栋501室 固定电话：0595-27971666 传真号码：0595-27973666 售后电话：13559590085 网    址：www.lantubio.com

  QQ号码：355902222

 邮    箱：355902222@qq.com 【说明书批准日期及修改日期】 批准日期：2013.05.12 次修改日期：2016.02.16